Вирус гепатита C (HCV) был идентифицирован в 1989 году как этиологический агент ни A ни B гепатита, случающегося после переливания крови. Вирус состоит из одно-нитевого 10 Кбаз РНК генома, защищенного нуклеакапсидой и окруженного липопротеиновой мембраной. Геном HCV кодирует структурные белки (ядра и оболочки) и неструктурные белки (NS2 - NS5). Основываясь на его морфологических особенностях и структуре, вирус был классифицирован как член семейства Flaviviridae.

Вирус гепатита C передается в основном парентерально при переливании крови, через кровь и продукты ее переработки и при случайных контактах с загрязненным медицинским оборудованием.

После заражения вирусом гепатита C наступает 5-12 недельный инкубационный период, за которым следует бессимптомное или умеренно острое заболевание, напоминающее по симптомам острые гепатиты A или B. До 50% острых случаев быстро прогрессирует в хроническую форму. Клинические симптомы хронической HCV инфекции обычно мягкие и ограничиваются астенией. Тем не менее, заболевание, в конечном итоге, может развиться в цирроз или гепатокарциному.

Оценки частоты встречаемости серо-положительных результатов для различных групп риска меняются в диапазоне от 0.18-0.8% для доноров и 9% у диализных пациентов, до 50% у использующих внутривенно наркотики и 70% у больных гемофилией.

Результаты недавних исследований указывают на передачу при половых контактах как на еще один потенциальный источник распространения вируса, а также перинатально (от матери ребенку).

Все беременные женщины должны обследоваться на наличие анти-HCV 2 раза в течение беременности: 1 раз - в первом триместре, 2 раз – в третьем триместре. Выявление анти-HCV у беременной женщины не является показанием к искусственному прерыванию беременности или родоразрешению с помощью кесарева сечения.

Вопросы вертикальной передачи HCV инфекции (от матери к плоду во время беременности) остаются пока не до конца изученными. Заражение ребенка возможно, если у матери имеется во время беременности у родов активная вирусная репликация При этом в крови женщины обнаруживаются и анти-HCV и, обязательно PHK-HCV. Но даже в этих случаях, вертикальный механизм передачи HCV реализуется лишь в 4-10% случаях, т.е. большинство новорожденных не инфицируются во время беременности и в родах.

Горизонтальная передача HCV-инфекции, также как и HBV-инфекции, возможны при тесных контактах матери и ребенка, особенно в первые месяцы-годы жизни и связана с микротравматизацией слизистых и кожных покровов. Следует учитывать, что при отсутствии повреждений (трещины) молочных желез у рожениц, ребенок может находиться на грудном вскармливании.

При обследовании детей, родившихся от матерей с анти-HCV, необходимо учитывать тот факт, что материнские анти-HCV могут циркулировать в крови ребенка довольно длительно – от 1 года до 1,5 лет. После этого срока анти-HCV, если они действительно пассивно попали в кровь ребенка от матери, у большинства детей исчезают и становится очевидным, что ребенок является здоровым, не инфицированным НСV. Таким образом, не рекомендуется проводить раннее (до 1 года жизни) или частое (ежемесячное) обследование детей на анти-HCV, т.к. выявление у них антител к вирусу гепатита С, может способствовать ложной диагностике вирусного гепатита С с нанесением психологической травмы родителям ребенка.

Первое исследование крови ребенку рекомендуется провести в 6 месяцев: необходимый объем включает показатели биохимии крови - АсАТ и АЛАТ.

При нормальных показателях, второе исследование крови проводится в 12 мес.: оно включает в себя диагностику АсАТ, АлАТ и анти-HCV. В случаях сохранения нормальных показателей биохимии крови и отсутствия анти-HCV, врачом может быть сделано заключение, что ребенок здоров. В тех случаях, когда показатели АсАТ и АлАТ находятся в норме, но диагностируются анти-HCV, проводится третье исследование крови в возрасте 1,5 года. Оно включает в себя диагностику АсАТ, АЛАТ, анти-HCV и РНК HCV. Только при повторном выявлении анти-HCV и обнаружении PHK-HCV врачом может быть диагносцирован гепатит С у ребенка. В противном случае, врач фиксирует, что ребенок здоров.

При измененных (повышенных) показателях АсАТ и АлАТ, обнаруженных во время первого исследования крови (в 6 мес.), необходимо провести дообследование ребенка на наличие анти-HCV и PHK-HCV, сразу после получения результатов биохимии крови.

Долгое время диагностика HCV была основана на наличии повышенного уровня аланин-амино-трансферазы (ALT), сохраняющегося, по крайней мере, в течение 6 месяцев в отсутствии других причин хронического цитолиза. Идентификация вируса гепатита C в качестве этиологического агента упростила диагностику за счет использования иммуноферментных методов и полимеразной цепной реакции (PCR).

Сложности диагностики маркеров возбудителя гепатита С относятся к характеру иммунного ответа, который известен как аутоиммунный феномен. Он проявляется в очень коротком времени и низком титре антител класса IgM, с одной стороны, и низком титре нерегулярных изотипов антител класса IgG к структурным и неструктурным белкам, с другой стороны. В наборах ИммуноКомб 3-его поколения различные антигены, сенсибилизированы в разных точках зубца гребня. Это позволяет регистрировать антитела к различным компонентам частичек вируса и решать проблемы «низкого» титра. В действительности, тест-системы ИммуноКомб диагностируют ранние Anti NS3, NS4, NS5 антитела так же хорошо, как и Anti-коровые антитела, которые разнесены в разные точки на гребне. Это играет главную роль в достоверном обнаружении ранней стадии инфицирования вирусом гепатита С. В таблице 30 представлены результаты международных испытаний тест-систем ИммуноКомб HCV [13].

Таблица 30. Результаты Международных испытаний ИммуноКомб HCV

Проведённые испытания тест-систем ИммуноКомб показали, что их чувствительность и специфичность соответствует уровню наиболее высокочувствительных ELISA-тестов Abbott и Ortho, одобренных FDA, и составляют 100% и 99,5% соответственно. При изучении характеристик тестов на отдельных сероконверсионных панелях было выявлено, что чувствительность тест-систем ИммуноКомб превосходит данные показатели референс-теста, так как тест-системы ИммуноКомб выявляли антитела в образцах, соответсвтующим более ранним стадиям сероконверсии. По качеству ИммуноКомб можно сравнить с подтверждающим тестом RIBA. Тест демонстрирует высокую специфичность и очень низкую кросс-реактивность, в том числе и при тестировании образцов от пациентов с аутоиммунными заболеваниями.

10.1. Дифференцированное обнаружение антител к вирусу гепатита С в сыворотке, плазме или цельной крови

Дифференцированную качественную диагностику антител к вирусу гепатита С следует проводить с помощью ИФА БПТ ИммуноКомб HCV согласно инструкции, прилагаемой к набору. Тест позволяет дифференцированно диагностировать антитела к коровому антигену и к неструктурным белкам NS3, NS4, NS5. Общую схему постановки анализа см. гл. 4.1, таблица 3, рисунок 3.

Результаты анализа проявляются в виде серо-голубых точек на поверхности зубца гребня. Качественная оценка результата осуществляется визуально, сравнением интенсивности окрашивания нижнего и/или среднего пятна каждого образца с интенсивностью окрашивания на зубце с положительным контролем, или автоматически на приборе КомбСкан III™(см. 4.1.6.). Средняя точка указывает на присутствие антител к коровому антигену HCV, нижняя точка – на антитела к белкам NS3, NS4, NS5.

10.1.1. Чувствительность и специфичность теста ИммуноКомб HCV

Чувствительность и специфичность теста ИммуноКомб HCV была оценена на панели из 1000 образцов сывороток в сравнении с ИФА –референс тестом. Несовпадающие результаты были переставлены дважды в обоих тестах и в подтверждающем тесте (ПЦР). Результаты приведены в таблице 31.

Таблица 31. Результаты испытаний

*Все пять несовпадающих результатов были проверены в подтверждающем тесте (ПЦР) и оценены как отрицательные.

Исходя из этих результатов, были вычислены следующие показатели теста:

• Чувствительность - 100%
• Специфичность – 99,4%