СПИД - Синдром Приобретенного Иммунодефицита. Заболевание вирусной природы. Возбудитель болезни - Вирус Иммунодефицита Человека (ВИЧ) - ретровирус открыт в 1983 году и идентифицирован как возбудитель СПИДА. ВИЧ состоит из геномной РНК, защищенной белковыми капсидом и наружной оболочкой. Различают два подтипа ВИЧ-1 и ВИЧ-2. Оболочечные белки являются основными антигенами, вызывающими иммунный ответ. Серологическая диагностика основана на специфическом обнаружении антител к белкам оболочки вируса. Самого факта обнаружения антител (как правило IgG класса) в сыворотке крови или в слюне достаточно для постановки лабораторного диагноза ВИЧ инфекции.

Главные пути передачи - половой контакт, заражение с инфицированной кровью и продуктами ее переработки, а также передача от матери плоду и новорожденному. ВИЧ после попадания в организм человека размножается, главным образом, в T4 лимфоцитах, которые играют ключевую роль в поддержании иммунологического гомеостаза человека. Снижение количества T4 лимфоцитов в результате прогрессирования болезни приводит к сопутствующим инфекциям, что, в конечном итоге, заканчивается фатальным исходом.

Передача ВИЧ от матери к плоду может происходить во время беременности, родов и при грудном вскармливании. В соответствии с приказом Минздрава России от 19.12.2003 г. № 606 обследование беременной на ВИЧ-инфекцию следует проводить двукратно: при первичном обращении по поводу беременности и в сроки 34-36 недель. Если беременная не наблюдалась у врача акушера-гинеколога, и обследование на ВИЧ во время беременности не проводилось, оно должно осуществляться с помощью Быстрых Простых Тестов при поступлении женщины на роды[161].

Остро стоящие проблемы диагностики ВИЧ-инфекции и вирусных гепатитов на ранних стадиях заражения заставляют пересматривать существующие схемы диагностики. Первоначально все обследования проводились по классической схеме: ELISA – анализ с последующим подтверждением Вестерн Блот. Дальнейшие исследования показали, что надежность результатов комбинации ELISA и/или быстрых простых тестов, таких как ИммуноКомб, агглютинационных тестов не уступает, а в некоторых случаях, при использовании быстрых простых тестов, превосходит надежность результатов комбинации ELISA / Вестерн Блот при значительно меньшей стоимости.

Впервые в 1992 году ВОЗ представила новую схему скрининга, основанную на комбинации двух отличающихся по составу антигенов ELISA и/или быстрых простых тестов, и минимизирующую использование дорогих подтверждающих тестов [162]. В 1997 году ВОЗ модифицировала эту схему включив в нее третью стратегию [163].

Выбор стратегии зависит от цели тестирования и от распространенности ВИЧ инфекции в обследуемой популяции. В этих стратегиях UNAIDS и ВОЗ рекомендуют использование комбинации быстрых простых тестов и/или ELISA тест-систем вместо комбинации ELISA\Вестерн Блот. ВОЗ неоднократно подчёркивает, что в определённых ситуациях более эффективно применение быстрых простых тестов (RST). При этом ВОЗ подчеркивает, что порядок использования и подбор наиболее подходящих Быстрых Простых Тестов в зависимости от того для каких целей они будут использованы, исключительно важен для окончательных результатов выбранной стратегии. Такой подбор может быть осуществлен на основании результатов сравнительных испытаний, которые проводятся ВОЗ с целью отбора для своих программ Быстрых Простых Тестов. Тесты, зарекомендовавшие себя не только как высоко чувствительные и специфичные, но и наиболее подходящие и удобные для постановки небольшого количества анализов, по данным испытаний ВОЗ [164, 165], сведены в таблицу 32.

Таблица 32. Быстрые простые тесты, прошедшие испытания ВОЗ

Название (производитель)	Serodia-HIV-1/2  (Fujirebio)	CAPILLUS  HIV-1/HIV-2 (Trinity Biotech plc)	ИммуноКомб BISPOT HIV 1&2 (PBS Orgenics)	GENIE II HIV-1/HIV-2 (Bio-Rad)
Отчет №	8	9	9	14
Чувствительность	100 (98.5-100.0)	100.0 (99.6-100.0)	100.0 (99.6-100.0)	100 (97.7 -100)
Специфичность	99.3 (98.5-100.0)	98.8 (97.6-100.0)	99.7 (99.1-100.0)	99.3 (98.1 -100)
Вариация интерпретации(%)	6.3	0.0	4.5	0.7
Цена за тест($)	2.8	2.2	1.7	2.55
Простота Выполнения	Сложный	Самый простой	Самый простой	Простой
Рекомендован как	Подходящий	Подходящий	Наиболее подходящий	Подходящий
Неопределенные результаты(%)	0	0	0.2	0.2

Из представленных данных видно, что наиболее подходящими для скрининга являются системы GENIE и ИммуноКомб как наиболее чувствительные и специфичные. Лучшим для обследования доноров признан тест ИммуноКомб, т.к. он является наиболее простым в применении и его специфичность выше, чем у других отобранных тестов. Более того, при тестировании сероконверсионной панели было показано, что только тест ИммуноКомб диагностирует антитела к ВИЧ-1 раньше на 8,5 дней, чем референс-тест (ELISA ENZYGNOST). Остальные тесты выявляли сыворотки данной панели позже, чем референс-тест.

В последние годы БПТ, разработанные за рубежом, появились и в России. В 1993 году был испытан и разрешен приказами МЗ РФ для обследования доноров крови, органов и тканей человека и скрининга населения единственный Быстрый Простой Тест ИммуноКомб BISPOT HIV 1&2 (ЗАО «Биоград») и быстрый подтверждающий тест – Иммуноблот ИммуноКомб HIV COMBFIRM (ЗАО «Биоград»).

В 2001 году впервые в Рамках Государственных испытаний иммуноферментных тест-систем для диагностики антител к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 были исследованы пять БПТ, зарегистрированных МЗ РФ [13]:

• «Determine HIV 1,2», ф. Эббот лабораториес, США;
• «Genie II HIV-1 / HIV-2», ф. Био-Рад, Франция;
• «Multispot HIV-1 / HIV-2, ф. Био-Рад, Франция;
• «ИммуноКоб BISPOT HIV 1&2», ЗАО «Биоград», Россия (изготовлен из компонентов быстрого теста ф. Орженикс, Израиль);
• «ВИЧ-Экспресс», ЗАО «Вектор-Бест», Россия.

Три из пяти представленных тестов являются тестами, в основе которых лежит принцип иммунохроматографии. «ВИЧ-экспресс»- первый тест, основанный на принципе «дот-анализа», разработанный отечественными специалистами.

Среди принятых на Госиспытания, БПТ ИммуноКомб BISPOT HIV 1&2 занимает особое место. Он основан на принципе твердофазного иммуноферментного анализа (иммуно-дот).

Препарат представляет собой оригинальную разработку, которая позволяет проводить иммуноферментный анализ без применения специального оборудования и с минимальным участием оператора.

Испытания БПТ проводились на стандартных панелях ГИСК им. Л.А.Тарасевича: панели из 16 сывороток, содержащих антитела к ВИЧ-1 в низких концентрациях ОСО-4228-214-02 П, панели из 20 сывороток, не содержащих антитела к ВИЧ ОСО42-28-214-02П, референс-панели сывороток, содержащих и не содержащих антитела к ВИЧ-1 (субтипы А.В.С), ВИЧ-2 ОСО 42-28-327-01.

При изучении чувствительности, которая на стандартной панели должна составлять – 100%, выявлено: тесты «Determine HIV 1/2», «Genie HIV 1/ HIV 2», «ИммуноКомб BISPOT HIV 1&2» выявили все 16 сывороток стандарта ОСО 4228-212-02 П, тогда как тест «Multi Spot HIV 1/ HIV 2» не выявил – 2 сыворотки, а отечественный быстрый тест «ВИЧ -Экспресс» не выявил 15 из 16 сывороток стандарта.

При исследовании сывороток стандартной панели, не содержащих антител к ВИЧ– ложноположительные результаты были выявлены для 1 сыворотки панели (№ 11 - + сл.) при исследовании сывороток в тесте «ВИЧ – Экспресс».

Во всех анализах референс-панели были получены результаты, соответствующие исходным характеристикам сывороток, входящих в данную панель.

По результатам Госиспытаний только два БПТ – ИммуноКомб BISPOT HIV 1&2 и Genie II HIV-1/ HIV-2 были рекомендованы для применения на территории России в диагностических лабораториях, для анонимных кабинетов, а также для обследования доноров крови при ургентных ситуациях.

Быстрый подтверждающий тест – Иммуноблот ИммуноКомб HIV COMBFIRM, по результатам этих же Госиспытаний, рекомендован для постановки окончательного диагноза и подтверждений наличия антител к ВИЧ (приказ 292 от 30.07.2001).

В 2003 году, согласно Указанию Зам. Министра здравоохранения РФ – Г.Г.Онищенко, были проведены очередные Государственные испытания препаратов, предназначенных для серодиагностики ВИЧ-инфекции [13].

Для изучения были предоставлены следующие П/Б-тесты:

• «Determine HIV 1/2», ф. Эббот лабораториес, США.
• «Genie II HIV-1/ HIV-2», ф. Био-Рад, Франция.
• «ИммуноКомб BISPOT HIV 1&2», ЗАО Биоград, Россия.
• «Serodia – HIV 1/2», ф. Фуджеребиа, Япония.
• Ретрочек ВИЧ 1/2 WB,ф. Квалпро, Индия.

БПТ «Serodia HIV 1/2» , « Ретрочек ВИЧ 1/2 WB» участвовали в Госиспытаниях впервые. «Serodia HIV1/2» основан на латекс-агглютинации, «Ретрочек ВИЧ 1/2 WB»основан на принципе иммунохроматографии. Для Госиспытаний были использованы следующие материалы: стандартная панель сывороток, содержащих антитела к ВИЧ-1 – ОСО 42-28-212-02 П – 16 сывороток, стандартная панель сывороток, содержащих антитела к ВИЧ-2 – ОСО 42-28-216-02 – 8 сывороток, стандартная панель сывороток, не содержащих антитела к ВИЧ ОСО 42-28-214-02 П – 20 сывороток. Результаты Госиспытания БПТ представлены в табл.33

Таблица 33. Изучение 5 БПТ на стандартных панелях ГИСК им.Л.А.Тарасевича.

П/Б тесты		Serodia HIV 1/2	Determine  HIV1/2	Иммунокомб BISPOT HIV 1&2	Genie II HIV1/HIV2	Retrocheck HIV WB
Стандартные панели	ВИЧ 1+ ОСО 422821202П 16 сывороток	16/16	16/16	16/16	15/16	-
	ВИЧ 2+ ОСО 422821602П 8 сывороток	8/8	8/8	8/8	8/8	-
	ВИЧ - ОСО 422821402П 20 сывороток	0/20	0/20	0/20	0/20	0/20
	Референс-сыворотка ВИЧ-2 1 сыворотка	1/1	1/1	1/1	1/1	-
	Референс-панель  ОСО 422832704 24 сыворотки		-	-	-	0/4 20/20

Как видно из таблицы 33, три БПТ – «ИммуноКомб BISPOT HIV 1&2», «Determine HIV 1/2», «Serodia – HIV 1/2», выявили все 16 сывороток панели ОСО 42-28-212-02 П, тест «Genie II HIV-1/ HIV-2» - из 16 сывороток не выявил одну сыворотку - №2.

Сыворотки стандартной панели ОСО 42-28-216-02, содержащие антитела к ВИЧ-2 – 8 образцов – выявлены 4 БПТ.

Исследованные БПТ ни в одном случае не давали ложноположительных результатов при исследовании сывороток панели ОСО 42-28-214-02 П.

БПТ «Ретрочек ВИЧ 1/2 WB « был исследован на референс-панели ОСО42 -28-32704, состоящей из 24 сывороток с различной реактивностью в отношении субтипов А, В и С ВИЧ-1 и ВИЧ-2.Все сыворотки, содержащие специфические антитела были этим тестом выявлены.

Пять вышеуказанных БПТ были изучены на клиническом материале, специально отобранном для этих исследований и аттестованном предварительно методом ИФА и в иммуноблоте.

В панели клинического материала были представлены:

• Сыворотки №1Г - №12Г, содержащие антитела к ВИЧ-1 и антиген ВИЧ-1 (р24) в различных концентрациях.
• Сыворотки №1Г - №15Г – содержащие антитела к ВИЧ-1 и в отдельных образцах антиген ВИЧ-1 (р24) в различных концентрациях.
• Сыворотки беременных - №Б1 - №Б18.
• Сыворотки пациентов с диагнозом гепатит С – HCV3 – HCV8, HCV10, HCV11.
• Сыворотки пациентов с диагнозом гепатит В – HBC4 – HBC8; HBV1 – HBV12.
• Сыворотки доноров крови D1 – D34.
• Серо-конверсионная панель №9017, ф. «Партнер Бразерс», США.

Характеристика сывороток и результаты испытаний пяти БПТ представлены в таблицах 34, 35, 36.

Таблица 34. Изучение 5 БПТ на клиническом ВИЧ-позитивном материале

БПТ					Serodia HIV 1/2	Deter-mine HIV1/2	Иммунокомб II ВИЧ1+2 Биспот	Genie II HIV1/ HIV2	Retro- check HIV WB
Характеристика сывороток в ИФА и ИБ	шифр	ИФА (О.П.)		иммуно-блот***
		анти-тела*	анти-ген**
	1г	>3,0	0,391	ВИЧ-1	+	+	+	+	+
	2г	>3,0	0,198	ВИЧ-1	+	+	+	+	+
	3г	>3,0	0,231	ВИЧ-1	+	+	+	+	+
	5г	1,24	2,008	неопред	+	+	+	-	+
	6г	>3,0	0,026	ВИЧ-1	+	+	+	+	+
	7г	>3,0	0,229	ВИЧ-1	+	+	+	+	+
	8г	>3,0	0,364	ВИЧ-1	+	+	+	+	+
	9г	>3,0	0,360	ВИЧ-1	+	+	+	+	+
	10г	>3,0	0,157	ВИЧ-1	+	+	+	+	+
	11г	>3,0	0,252	ВИЧ-1	+	+	+	+	+
	12г	>3,0	1,196	ВИЧ-1	+	+	+	+	+
	1т	0,312	0,056	отрицат	-	-	-	-	-
	2т	1,08	0,049	отрицат	+	-	-	-	-
	3т	1,02	0,183	отрицат	+	-	-	-	-
	4т	>3,0	0,135	неопред	+	+	+	+	+
	5т	>3,0	0,325	неопред	+	+	+	+	+
	6т	>3,0	0,151	ВИЧ-1	+	+	+	+	+
	7т	1,83	0,053	отрицат	-	-	-	-	-
	8т	>3,0	0,849	ВИЧ-1	+	+	+	+	-
	9т	>3,0	0,034	ВИЧ-1	+	+	+	+	+
	10т	>3,0	0,024	неопред	+	+	+	+	+
	11т	2,39	0,022	неопред	+	+	+	+	+
	12т	1,97	0,126	неопред	+	+	-	-	-
	13т	>3,0	0,036	ВИЧ-1	+	+	+	-	+
	14т	>3,0	0,048	неопред	+	+	+	+	+
	15т	0,167	0,032	отрицат	-	-	-	-	-

*     - тест-система "Genscreen Plus HIV Ag/Ab" производства фирмы "Bio-Rad" (ОП крит. 0,172)

**   - тест-система "Genetic Systems HIV-1 Ag" производства фирмы "Bio-Rad" (ОП крит. 0,101)

*** - тест-система "New Lav Blot I" производства фирмы "Bio-Rad"

Как видно из таблицы 34, наилучшие результаты диагностики ВИЧ-позитивных материалов распределились среди БПТ следующим образом: «ИммуноКомб BISPOT HIV 1&2», «Serodia HIV 1/2», «Детермин ВИЧ1/2», «Ретрочек ВИЧ1/2», «Genie HIV-1|HIV-2».

При использовании серо-конверсионной панели № 9017(Табл.35), наибольшее количество позитивных результатов – 6 сывороток из 11 сывороток, входящих в панель были выявлены БПТ ИммуноКомб BISPOT HIV 1&2, остальные 4 теста выявили позитивными по 2 последние сыворотки из 11 сывороток, входящих в панель № 9017. Это подтверждает международные результаты о том, что среди БПТ только ИммуноКомб диагностирует ранние сероконверсионные сыворотки.

Таблица 35. Изучение 5 БПТ на сероконверсионной панели BBI № 9017

БПТ					Serodia HIV 1/2	Deter-mine HIV1/2	Иммунокомб II ВИЧ1+2 Биспот	Genie II HIV1 /HIV2	Retro-check HIV WB
Сыворотки панели	шифр	ИФА (О.П.)		иммуно-блот***
		анти-тела*	анти- ген**
	1	0,032	0,041	отрицат	-	-	-	-	-
	2	0,022	0,046	отрицат	-	-	-	-	-
	3	0,041	0,034	отрицат	-	-	-	-	-
	4	0,70	0,035	отрицат	-	-	-	-	-
	5	0,113	0,033	отрицат	-	-	-	-	-
	6	0,248	0,036	отрицат	-	-	+	-	-
	7	0,822	0,053	отрицат	-	-	+	-	-
	8	2,142	0,110	отрицат	-	-	+	-	+
	9	1,824	0,195	неопред	+	-	+	-	+
	10	2,878	0,176	неопред	+	+	+	+	+
	11	>3,0	0,085	неопред	+	+	+	+	+

*      - тест-система "Genscreen Plus HIV Ag/Ab" производства фирмы "Bio-Rad" (ОП крит. 0,106)

**   - тест-система "Genetic Systems HIV-1 Ag" производства фирмы "Bio-Rad" (ОП крит. 0,108)

*** - тест-система "New Lav Blot I" производства фирмы "Bio-Rad"

При исследовании сывороток беременных (18 образцов), сывороток крови пациентов с диагнозом гепатит В и С (25 образцов), сывороток крови доноров (34 образца) , ни в одном случае не было выявлено ложно-положительных результатов, т.е. специфичность – 100% (Табл.36).

Таблица 36. Специфичность БПТ на серонегативных сыворотках

БПТ		Serodia HIV 1/2	Determine  HIV1/2	ИммуноКомб BISPOT HIV 1&2	Genie II HIV1/HIV2	Retrocheck HIV WB
сыворотки	доноры	0/34	0/34	0/34	0/34	0/34
	беременные	0/18	0/18	0/18	0/18	0/18
	гепатит С	0/8	0/8	0/8	0/8	0/8
	гепатит В+С	0/5	0/5	0/5	0/5	0/5
	гепатит В	1+/12	0/12	0/12	0/12	0/12

Таким образом, результаты испытаний БПТ показали, что все исследованные препараты обладают выраженной специфичностью, что особенно важно при проведении быстрого тестирования неизвестного сывороточного материала.

Можно сказать, что БПТ гарантируют, при правильной постановке и хорошем качестве сывороток, отсутствие ложно-положительных реакций.

Большинство исследованных БПТ имеют достаточную чувствительность при диагностике антител к ВИЧ-1 и ВИЧ-2, не уступающую чувствительности тест-систем для классического иммуноферментного анализа.

Это подтверждает предлагаемую ВОЗ концепцию стратегии, по которой в определенных случаях БПТ могут с успехом заменять классический иммуноферментный анализ. При этом постановка серологического диагноза ВИЧ-инфекции ускоряется и значительно упрощается.

Среди тест-систем, рекомендуемых МЗ РФ для постановки окончательного лабораторного диагноза и подтверждения наличия антител к ВИЧ методом иммунного блота, особое место занимает тест – иммуноблот ИммуноКомб HIV COMBFIRM, который, являясь подтверждающей системой, может быть отнесен к БПТ. Принцип анализа материала с помощью ИммуноКомб HIV COMBFIRM аналогичен ИммуноКомб BISPOT HIV 1&2. Но при простоте постановки теста, он позволяет расшифровать белковый профиль ВИЧ-положительной сыворотки, подтвердив или опровергнув результаты предварительного исследования.

В 2004г. на базе спецлаборатории ГИСК им. Л.А.Тарасевича была проведена очередная переаттестация тест-системы ИммуноКомб HIV COMBFIRM для диагностики антител к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 методом иммуноблота (ЗАО «Биоград») [13]. Переаттестацию проводили, используя сывороточный материал стандартной панели ОСО 42-28-212-02П (серия 011) – 4 сыворотки в 2-х повторах; клинический материал – 5 сывороток с шифром Т, содержащих антитела к ВИЧ-1 от больных ВИЧ-инфекцией, 5 значений ОП; сероконверсионную панель № 9017 (Bio Clinical Partners, Inc HIV Seroconversion Panel(catalog No. HIV 9017) Franklin, MA 02038 USA). Кроме того, был дополнительно обследован клинический материал (8 сывороток), поступивший из Московского центра по СПИД и имевший по иммунному блоту (классический ИБ) – характеристику сывороток – неопределенная.

Весь клинический материал аттестован в лаборатории стандартизации и контроля МИБП против арбовирусных инфекций, риккетсиозов и СПИДа ГИСК им. Л.А. Тарасевича.

Результаты испытаний обобщены в таблице 37. При тестировании сероконверсионной панели было выявлено, что тест-система ИммуноКомб HIV COMBFIRM диагностирует антитела к ВИЧ-1 раньше на 4 дня, чем другие иммуноблоты.

Таблица 37. Результаты испытаний тест-системы ИммуноКомб HIV COMBFIRM

№№ образца	левый гребень			правый гребень			результат
	Ig G	p 24	p 31	gp 120	gp 41	gp 36
К+	+	+	+	+	+	+	ВИЧ 1,2
К-	+	-	-	-	-	-	отрицательный.
ОСО 42-28-212-02П сер.011
3	+	+	-	+	+	-	ВИЧ 1
3	+	-	-	+сл.	+	-	ВИЧ 1
4	+	+сл.	-	-	+сл.	-	ВИЧ 1
4	+	+сл.	-	-	+сл.	-	ВИЧ 1
15	+	-	-	+сл.	+сл.	-	ВИЧ 1
15	+	-	-	+сл.	+сл.	-	ВИЧ 1
16	+	-	-	+сл.	+сл.	-	ВИЧ 1
16	+	-	-	+сл.	+сл.	-	ВИЧ 1
Клинический материал (сыворотки от ВИЧ-инфицированных пациентов)
7 Т	+	-	-	-	-	-	отрицательный
10 Т	+	+	-	-	+	-	ВИЧ 1
11 Т	+	+	-	-	+	-	ВИЧ 1
13 Т	+	-	-	+	+	-	ВИЧ 1
14 Т	+	-	-	+	+	-	ВИЧ 1
Сероконверсионная панель № 9017
1	+	-	-	+	-	-	неопределенный
2	+	-	-	+	-	-	неопределенный
3	+	-	-	+	-	-	неопределенный
4	+	-	-	+	-	-	неопределенный
5	+	-	-	+сл.	+сл.	-	ВИЧ 1
6	+	-	-	+сл.	+сл.	-	ВИЧ 1
7	+	-	-	+сл.	+	-	ВИЧ 1
8	+	-	-	+сл.	+	-	ВИЧ 1
9	+	-	-	+сл.	+	-	ВИЧ 1
10	+	+	-	+	+	-	ВИЧ 1
11	+	+	-	+	+	-	ВИЧ 1
Клинический материал (сыворотки от ВИЧ-инфицир. «неопределенные»)
5	+	+	-	-	+	-	ВИЧ 1
6	+	+	-	+	+	-	ВИЧ 1
7	+	+	+	+	+	-	ВИЧ 1
8	+	-	-	-	+	-	ВИЧ 1
11	+	+	-	+	+	-	ВИЧ 1
13	+	+	-	-	+	-	ВИЧ 1
14	+	+	-	+	+	-	ВИЧ 1
15	+	+	-	+	+	-	ВИЧ 1

На основании полученных при переаттестации данных, комиссия рекомендует тест-систему ИммуноКомб HIV COMBFIRM к применению в качестве подтверждающего теста при исследовании сывороток (плазмы) крови человека на антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2.

11.1. Дифференцированное обнаружение антител к вирусу иммунодефицита человека в сыворотке, плазме или цельной крови

Дифференцированную, качественную диагностику антител к вирусу иммунодефицита человека следует проводить с помощью ИФА БПТ ИммуноКомб BISPOT HIV 1&2 согласно инструкции, прилагаемой к набору. Тест позволяет дифференцированно диагностировать антитела к ВИЧ 1, 0 и ВИЧ 2. Общую схему постановки анализа см. гл. 4.1, таблица 3, рисунок 3.

Результаты анализа проявляются в виде серо-голубых точек на поверхности зубца гребня. Качественная оценка результата осуществляется визуально, сравнением интенсивности окрашивания нижнего и/или среднего пятна каждого образца с интенсивностью окрашивания на зубце с положительным контролем, или автоматически на приборе КомбСкан III™ (см. 4.1.6.). Средняя точка указывает на присутствие антител к ВИЧ 2, нижняя точка – на антитела к ВИЧ1, ВИЧ0.

11.1.1. Чувствительность и специфичность теста ИммуноКомб BISPOT HIV 1&2

Специфичность теста ИммуноКомб Bispot HIV 1&2 была определена на 400 образцах нормальной сыворотки крови здоровых доноров.

Специфичность - 99,75% (один образец дал ложноположительную реакцию с ВИЧ 2).

Чувствительность – 100%. Чувствительность теста была подтверждена с использованием 8 сероконверсионных панелей, в том числе набора Societ National de Tranfusion Sanguine. Результаты согласуются с критерием чувствительности, разработанным в Laboratoire National de la Sant во Франции.

В таблице 38 приведены результаты международных испытаний БПТ ИммуноКомб BISPOT HIV 1&2.

Таблица 38. Результаты международных испытаний теста ИммуноКомб BISPOT HIV 1&2

Год	Страна	Место прове дения	Кол-во образцов	Типы образцов/Панели	Чувст- витель- ность	Специфичность	Выявление пер сероконверсии (%)
1988	Франция	Гренобль SHU	683	сыворотки от сероположительных пациентов сыворотки от сероотрицательных пациентов сыворотки пациентов из группы высокого риска сыворотки новорожденных от сероположительных матерей	100%	99%
1990	Бельгия	Лаборатория E. Van Kerckhoven	528	сыворотки пациентов Африканского происхождения сыворотки пациентов Европейского происхождения сыворотки пациентов Южно-Американского происхождения	99,6%	100%
1991	Франция - Германия	Национальный Институт Трансфузиологии	2052	1898 - донорская кровь Панели SNTS, INTS, BORTEAUX, Франция	100%	99,83%	100%
1992, 1993	Междуна-родные исследо-вания: Израиль, Германия, Франция, Южная Африка		1156	донорская кровь ВИЧ 1 пациенты ВИЧ 2 пациенты кровь пациентов с аутоимунными заболеваниями пациенты, больные ВИЧ 1 + ВИЧ 2 сероконверсионные панели BBI.Панели Serologicals	100%	100%
1993	Франция	Bichat Hospital, Париж	40	Персероконверсионные сыворотки,  ВИЧ1 и ВИЧ 2 позитивные образцы; разбавленные ВИЧ1 и ВИЧ 2 позитивные образцы; неопределённые образцы	100%	не определялась
1993	Израиль	Kaplan Hospital, Реховот	476	SNTS-панель, Франция сероконверсионные панели BBI, панели Serologicals.	100%	100% ВИЧ-1 99,75% ВИЧ-2
1994	Германия	Georg-Speier Haus Франкфурт	2815	Донорская кровь Кровь пациентов с ВИЧ 1 + ВИЧ 2 Кровь беременных женщин Пациенты с аутоиммуными заболеваниями 10 сероконверсионных панелей BBI 5 панелей Georg-Speuer-Haus, Германия	100%	ВИЧ1-99,6% ВИЧ2-99,4%
1994	Бельгия	ВОЗ-центр, Институт Тропической Медицины	68	сероконверсионные панели D.I.G.K.L.N.R., BBI, США панели 2212-2214, Serologicals.	Определение антител к ВИЧ на 8,5 дней раньше Вестерн-Блот
1994	Сенегал	Лаборатория Вирусо- логии и Бактерио- логии	508	Сыворотки: ВИЧ-1 сероконверсионные и ВИЧ-2-позитивные; ВИЧ-1+ВИЧ-2 позитивные, панель BBI.	100%	99,6%
1995	Франция	Мульти-центр – переоценка ADM	50	Сыворотки: ВИЧ-1 сероконверсионные, ВИЧ-1 предсероконверсионные пер-сероконверсионные, ВИЧ-1 субтип М ВИЧ-1 субтип 0 ВИЧ-2 позитивные  не-B субтип позитивные SNTS панель (группа ретровирусов) BBI панель, ADM панель	В соответствии с критериями ADM	В соответствии с критериями ADM	100%
1997	США	Университет Maryland, Baltimore	68	Сыворотки от пациентов Камеруна, Африки и Дальнего Востока: ВИЧ-1 сероконверсионные  неопределённые, ВИЧ-1+ВИЧ-2 позитивные, ВИЧ-1 субтип М, ВИЧ-1 субтип 0, ВИЧ-2 позитивные	100%	не определялась
1998	Израиль	Явна	163	Образцы SFTS, содержащие антитела к Toxo IgG, Toxo IgM, CMV IgG и IgM, HBsAG, anti-HBs antigen, HBcIgG, HCV, Rubella IgG, Rubella IgM. Панели BBI	не определялась	100%
1999	Франция	Мульти-центр – переоценка AFSSAPS	65	Сыворотки: ВИЧ-1 сероконверсионные  ВИЧ-1 предсероконверсионные пер-сероконверсионные ВИЧ-1 субтип М ВИЧ-1 субтип 0 ВИЧ-2 позитивные  не-B субтип позитивные SFTS панель (группа ретровирусов), субтип O панель (IAF) Сероконверсионная и персероконверсионная панели	В соответствии с критериями AFSSAPS	не определялась	100%
2002	Израиль	Явна	683	донорская кровь, кровь беременных женщин HCV HBsAg HTLV положит. сыворотки, сероконверсионные, персероконверсионные  ВИЧ-1 субтип 0, сыворотки, содержащие интерферирующие вещества. Панели BBI.	100%	99,53%	100%
2002	Франция	AFSSAPS	300	Персероконверсионная и сероконверсионная панели SNTS,персероконверсионная и сероконверсионная BBI панели Отрицат. образцы (Панель Краснухи)	100%	В соот ветст вии с критериями AFSSAPS	100%

Испытания тестов ИммуноКомб показали, что этот тест корректно идентифицирует положительные результаты. Достоверность отрицательных результатов, полученных только с помощью теста ИммуноКомб ВИЧ 1+2, сравнимо с достоверностью результатов, достигнутых при комбинации 2-х или более других тестов (ELISA, иммунофлюоресцентные тесты и Вестерн-блот). Тест-системы ИммуноКомб демонстрируют высокую степень дифференциации результатов при определении антител к ВИЧ 1и ВИЧ 2. При тестировании сероконверсионной панели было показано, что ИммуноКомб определяет антитела к ВИЧ1 раньше на 8,5 дней, чем Вестерн-блот и Organon Vironostika системы.

ИммуноКомб диагностирует пересероконверсионное состояние. Отсутствуют ложно – положительные результаты при обследовании пациентов с аутоиммунными заболеваниями или с ревматоидным фактором; незначительный процент ложно-положительных результатов дают образцы от пациентов с SLE, аналогично другим широко используемыми ELISA тестам.

При всех испытаниях были подчёркнуты удобство и простота постановки анализа, а также время анализа – 37 минут.

11.2. Подтверждающий тест (иммуноблот) на наличие антител к вирусу иммунодефицита человека в сыворотке, плазме или цельной крови

Дифференцированное определение IgG антител к основным антигенным детерминантам вируса иммунодефицита человека типов 1 и 2 (ВИЧ1 и ВИЧ2), включая подтип 0 (ВИЧ1) в заведомо ВИЧ-положительных образцах сыворотки или плазмы крови человека следует проводить с помощью ИФА БПТ ИммуноКомб HIV COMBFIRM (иммуноблот) согласно инструкции, прилагаемой к набору. Общую схему постановки анализа см. гл. 4.1, таблица 3, рисунок 3.

Результаты анализа проявляются в виде серо-голубых точек на поверхности зубца гребня. Проявление только Внутреннего Контроля указывает, что соответствующий образец отрицателен по антителам к ВИЧ-1 и ВИЧ-2.

Образец, дающий только одну изолированную круглую окрашенную точку ВИЧ антигена или обе точки p24 и p31, но без точек на правом зубце считается сомнительным (неопределенным).

Образец, дающий, как минимум две круглых окрашенных точки ВИЧ антигена, включая одну представляющую gp41 или gp36 (рис. 14), считается ВИЧ положительным. В этих случаях ВИЧ-1 от ВИЧ-2 можно отличить следующим образом:

• Наличие точки gp41 (при отсутствии gp36) указывает на то, что образец положителен по антителам к ВИЧ-1.
• Наличие точки gp36 указывает, что образец положителен по антителам к ВИЧ-2.

Рисунок 14. Гребень КомбФирм

Наиболее часто встречающиеся сочетания точек и их интерпретация приведены в таблице 39.

Таблица 39. Интерпретация результатов ИммуноКомб HIV COMBFIRM

Сочетание ВИЧ-точек на		Интерпретация
Левом зубце	Правом зубце	Положителен по
p24 и/или p31	gp41	ВИЧ-1
нет точек	обе gp41 и gp120
p24 и/или p31	только gp36 или вместе с gp41	ВИЧ-2
p24 и/или p31	и gp36 и gp41 и gp120	Только ВИЧ-2 или СОВМЕСТНО с ВИЧ-1
p24 и/или p31	нет или gp120	НЕОПРЕДЕЛЕННЫЙ (сомнительный)
нет точек	gp41 или gp120 и/или gp36
Нет точек	Нет точек	Отрицательный

Обратите внимание:

• Любая слабо окрашенная точка на зубце должна считаться положительной
• В случае неопределенного (сомнительного) результата следует взять новый образец и повторить анализ.

11.2.1. Чувствительность и специфичность теста ИммуноКомб HIV COMBFIRM

Чувствительность и специфичность теста по ВИЧ1 определяли в мультицентре (Франция) на 559 образцах, которые включали 154 отрицательных, 318 ВИЧ 1 – положительных, 35 положительных, согласно ELISA и неопределенных согласно Western blot, 52- положительных, согласно ELISA и отрицательных в Westetn blot. Негативные образцы включали образцы от беременных женщин, пациентов с аутоиммунными заболеваниями и гепатитами. Результаты приведены в таблице 40.

Таблица 40. Результаты исследований

HIV Status		ИммуноКомб HIV COMBFIRM
ELISA	Wеstern blot	Отрицательный	Положительный	Неопределенный
Отрицательный	Отрицательный	150	0	4
	Положительный	1	305	12
Положительный	Неопределенный	20*	6	9
Неопределенный		44	1	7

*Включая 6 образцов, имеющих в Westetn blot только полосы р17 и р 55.

Исходя из этих результатов, были вычислены следующие показатели теста:

• Чувствительность – 99,7%
• Специфичность – 100%

Чувствительность и специфичность по ВИЧ 2 определялась на 192 образцах от пациентов из африканских стран, которые включали 48 ВИЧ отрицательных, 51 ВИЧ1 положительных, 84 ВИЧ 2 положительных и 9 с ВИЧ1 и ВИЧ2. Результаты приведены в таблице 41.

Таблица 41. Результаты исследований

HIV Status		ИммуноКомб HIV COMBFIRM
		Отрицательный	HIV1	HIV2	HIV 1&2	Неопределенный
Отрицательный		48	0	0	0	0
Положительный	HIV1	0	51	0	0	0
	HIV2	0	0	70	10	4
	HIV1&2	0	0	0	9	0

Исходя из этих результатов, были вычислены следующие показатели теста:

• Чувствительность –100%
• Специфичность – 100%