Глава IV. Результаты международных испытаний тест-систем для диагностики гепатитов

к.х.н. Дробченко С. Н., проф. Кальво А., проф. Фальк Ф.

ЗАО «Биоград», СП; Orgenics PBS, Франция

Международные испытания тест-систем, предназначенных для выявления вирусных гепатитов, способствуют совершенствованию диагностики: повышению чувствительности и специфичности, увеличению процента ранней диагностики [35,42-51]. В 1992 году референс - лаборатория Нидерландов совместно с Европейской группой разработала стандарты генодиагностики вирусных гепатитов [52]. С этого времени, по стандарту World White, панели сывороток, используемые при международных испытаниях диагностических систем, должны содержать образцы из различных регионов Азии, Африки, Америки и Европы. В них представлены антитела к вирусам гепатитов различных генотипов, что позволяет определять диапазон диагностики вирусных гепатитов. Трудности определения возбудителя гепатита С относятся к характеру иммунного ответа, который характеризуется, как Автоиммунный феномен и проявляется в очень коротком времени и низком титре антител класса IgM с одной стороны, и низком титре нерегулярных изотипов антител класса IgG к структурным и неструктурным белкам с другой стороны. Этот факт заставляет поднимать чувствительность существующих Elisa-тестов 3-ей генерации. Наборы ИммуноКомб 3-ей генерации основаны на различных антигенах, сенсибилизированных в разных точках зубца гребня. Это позволяет регистрировать разные антитела к различным компонентам частичек вируса и решать проблемы низкого титра. В действительности, тест-системы ИммуноКомб позволяют определить ранние Anti NS3, NS4, NS5, антитела так же хорошо, как и Anti-коровские антитела, которые разнесены в разные точки на гребне, что играет главную роль в правильном обнаружении в ранней стадии вируса гепатита С.

В таблице 5 представлены результаты международных испытаний тест-систем ИммуноКомб HCV.

Таблица 5. Результаты Международных испытаний ИммуноКомб HCV

Проведённые испытания тест-систем ИммуноКомб показали, что их чувствительность и специфичность соответствует уровню наиболее высокочувствительных тестов Abbott и Ortho, одобренных FDA, и составляет 100% и 99,5% соответственно. При изучении характеристик тестов на отдельных сероконверсионных панелях было выявлено, что чувствительность тест-систем ИммуноКомб превосходит данные показатели референс-теста, так как тест-систем ИммуноКомб первыми выявляли образцы более ранних стадий сероконверсий. По качеству ИммуноКомб можно сравнить с подтверждающим тестом RIBA. Тест демонстрирует высокую специфичность и очень низкую кросс-реактивность. Так же тест показал низкий уровень перекрёста при тестировании образцов от пациентов с аутоиммунными заболеваниями.

В иммунодиагностике вируса гепатита В имеет особое значение выявление иммунохимических маркеров ВГВ: антигенов HBs Ag, антител Anti HBs, анти HBc. Это позволяет определить форму инфекции, сделать прогноз её течения и показания к вакцинации. Тест-системы ИммуноКомб выявляют 0.4-0.5 нг HBs Ag. При этом следует подчеркнуть, что тест-системы ИммуноКомб, выявляя в очень низких концентрациях антиген к ВГВ, позволяют определить все виды HBV частиц, что является наиболее строгим стандартом определения данной инфекции, известным под названием «Французский стандарт».

Данные по международным испытаниям тест – систем ИммуноКомб для выявления вируса гепатита B сведены в таблицу 6.

Таблица 6. Качество тестов ИммуноКомб HBsAg, определённое международными испытаниями

Год	Страна	Место проведения	Образцы и панели		Хар-ки панелей и референс-тесты	Чув- стви- тель- ность	Специ- фич- ность
			Кол-во	Характер Сывороток
1991	Франция	INSERM Lyon	266	199 HBsAg полож. образца 72 отриц. образца	Austria II, Abbott	99%	97,2%
1994	Израиль	Вирусологическая лаборатория	444	195 положит. 1 слабоположит. 248 отриц. образцов	Austria II, Abbott	100%	99,5%
1995	Франция	ADM, Париж, Национальный Институт Трансфузиологии	30	19 положит. сыворо ток разл. субтипов вируса гепатита B, 2 отрицат.образца разбавленных, 3 образца от недавно вакцинир.индивидуумов(< 0,5 нг/мл) 6 сывороток хронич. носителей HBV	панели DECODAGE, PL21-PL30, Франция	0,48	не определялась.
1998	Израиль	Орженикс, Явна	164	положит. сыворотки: к HBsAg – 1 положит.сыворотки: к anti Toxo IgG - 21 положит.сыворотки: к anti Toxo IgM - 20 положит.сыворотки: к anti Toxo IgM - 20 положит.сыворотки: к anti CMV IgG - 20 положит.сыворотки: к anti CMV IgM - 18 положит.сыворотки: к anti HBc IgG - 18 положит.сыворотки: к anti Rubella IgG -15 положит.сыворотки: к anti Rubella IgM-14 положит.сыворотки: к anti HBs AB - 6 положит.сыворотки: к anti HCV - 18 положит.сыворотки: к HIV – 12 отрицат. сыворотки: к HBsAg - 1	Панели BBI; США; сероконверсионная HIV, ADM панель, Франция	не определялась	100%
2001	Франция	Вирусологическая Лаборатория, CERV2, Париж	58	5 положит. сыворот. (0,4 – 0,9 нг/мл) 14 сильно положит. сывороток 8 слабо положит. сывороток. 12 отрицат. сыворо-ток, трудно опреде- ляемых согласно HBsAg, Abbott 19 отрицат. сыворот.	панель BBI; Axsym HBsAg, Abbott; Axsym HBsAg Confirma –tory AFFSAPS	? 0,5 нг/мл, 100%	100%
2003	Франция	Лаборатория Marquis Lanzenberg	71	71 образец от бере- менных женщин и позитивных к HCG	Abbott	не опре делял.	100%
2003	Франция	Федеральный медицинский Госпитальный Центр	150	142 образца от беременных женщин 8 положит. сывороток	Platelia Ag HBs Biorad	не определял.	100%

Проведенные испытания показали, что аналитическая чувствительность тестов ИммуноКомб HBsAg соответствует Европейскому стандарту(меньше или равно 0,5нг/мл). Обладая высокой чувствительностью и специфичностью (100% и 99,7%) тест системы ИммуноКомб выявляют сероконверсионные и низкотетражные сыворотки в той же или более низкой концентрации, чем референс-тесты. Независимо от субтипа вируса гепатита В тесты ИммуноКомб достоверно определяют присутствиеHBsAg.