V.1 Аналитические показатели

Аналитическая чувствительность отражает наименьшее количество (концентрацию) обнаруживаемого вещества в исследуемом материале.

Аналитическая специфичность определяется, как способность теста обнаруживать только искомое вещество или его маркер.

Клинические показатели:

Клиническая чувствительность. Оценка выполнения диагностического теста базируется на его способности корректно идентифицировать действительно-положительные и действительно-отрицательные образцы. При исследовании образцов на какую-либо инфекцию термин диагностическая (или клиническая) чувствительность отражает пропорцию инфицированных исследуемых материалов точно определенных как положительный результат.

Клиническая специфичность. Диагностическая (или клиническая) специфичность представляет собой пропорцию полученных отрицательных результатов в исследуемом материале, не содержащем субстанцию, на обнаружение которой и был разработан тест.

Для оценки показателей качества тест-систем обязательно должен использоваться материал, сочетающий потенциально взаимодействующие между собой факторы, непосредственно влияющие на результат проводимого анализа, такие как состав исследуемого материала, условия хранения, условия получения исследуемого материала, тепловая инактивация, а также наличие антикоагулянтов, продуктов гемолиза, гиперлипемия.

Более конкретно процедура получения Европейского Сертификата соответствия (СЕ) рассмотрена на примере фирмы Орженикс, которая в 2002 - 2003 годах повторно сертифицировала свою продукцию.

В таблице 7 приведены данные о материалах, использованных для определения показателей качества тест-систем ИммуноКомб в соответствии с требованиями CEN (более подробно см. главы III, IV).

Таблица 7. Количество и типы материалов, необходимых для оценки работы диагностикумов, используемых при скрининге крови на анти-ВИЧ-1, анти-ВИЧ-2, anti-HTLV I, anti-HTLV II, anti-HCV, HBsAg, и anti-HBc.

• Образцы включали 40 не-B субтипов; каждый субтип был представлен минимум тремя образцами.
• Образцы включали генотипы 1a–4a, представленные минимум 20 образцами каждого генотипа. Образцы также включали генотипы 4 не-a и 5, представленные минимум 10 образцами каждого генотипа.
• Включали различные субтипы.
• Определяли другие HBV маркеры.
• Дополнительные 10 панелей были утверждены уполномоченным лицом.
• Стандарт Франции и Великобритании – 0,5 нг/мл.

Оценка качества тест-систем ИммуноКомб производилась на основании сравнения с высококачественным тестом Abbot и ORTHO, утверждённым CEN, при привлечении групп населения, сравнимых по численности с населением Европы.

Положительные образцы различных генотипов, отбираемые у пациентов на разных стадиях болезни, имели различный набор антител, различные субтипы и т.д. Выявленные при скрининге крови положительные образцы (кроме тестов HBsAg) подтверждались как положительные тестом, имеющим маркировку CE. Новые тесты HBsAg90 сравнивались по качеству с уже имеющимися тестами HBsAg.

Отрицательные образцы, используемые для оценки теста, были взяты у целевых групп, для которых предназначен тест, таких как доноры, госпитализированные пациенты, беременные женщины.

Определение первой фазы инфекции (сероконверсии) было неотъемлемой частью испытания. При этом обязательным было, чтобы повторное исследование тех же и дополнительных сероконверсионных панелей, отобранных уполномоченным лицом, подтверждало первичные данные.

Более строгие требования, основанные на критериях ADA и AFSSAPS, Европейский комитет по стандартизации предъявляет к тестам, предназначенным для скрининга доноров [23]. Чувствительность таких тестов должна быть 100%, а специфичность – не менее 99,5% для ELISA и более 99% для RST тестов. Более того, для тестов ВИЧ обязательным условием является определение не менее 50% пер-сероконверсионных образцов (критерий AFSSAPS), а также сывороток не-B субтипа позитивных пациентов (критерий ADA); аналитическая чувствительность для HBsAg тестов должна быть не менее 0,5 нг/мл.

Чтобы подтвердить соответствие качества тестов ИммуноКомб для скрининга донорской крови, исследования были проведены в двух центрах сдачи крови, обследованы две группы доноров, при этом представители первой группы частично входили и во вторую группу. Специфичность рассчитывалась на основе частоты повторений ложно-позитивных результатов у доноров, негативных по определяемому маркеру. Клинические испытания тест-систем ИммуноКомб, согласно требованиям CEN, проводились не только на сероконверсионных панелях Serological(США), BBI(США), но и на пред-сероконверсионных и пер-сероконверсионных панелях BBI; также были исследованы положительные образцы ВИЧ-1 субтип 0 и не-B субтип (более подробно см. главу III).

Все сероконверсионные сыворотки были подтверждены Вестерн-блотом и ПЦР. Пред-сероконверсионные состояния (отсутствие антител, наличие только антигена p24) определялось только RNA тестами. Пер-сероконверсионные сыворотки (появление первых антител к gp160 и p24) были отрицательны в Вестерн-блоте и положительны в ПЦР и HIV антигене.

Испытания тестов ИммуноКомб, определяющих вирусные гепатиты, описаны в главе IV.

На основании данных, полученных в ходе испытаний, были вычислены аналитические и клинические показатели (табл. 8).

Таблица 8. Аналитические и клинические показатели тест-систем ИммуноКомб

Как видно из таблицы, качественные характеристики тестов ИммуноКомб полностью удовлетворяют требованиям CE-STS и могут быть использованы как для обследования пациентов, так и для скрининга донорской крови.

Кроме того, проведённые испытания показали, что

1. Тесты ИммуноКомб ВИЧ 1+2:

• выявляют первые ранние антитела сероконверсии на 8,5 дней раньше Вестерн-блот, показывая незначительную разницу (0,8 дня) с подтверждающим тестом RIBA
• выявляют персероконверсионное состояние
• выявляют не-B субтип положительных сывороток
• показывают 100% чувствительность при определении антител к ВИЧ-1 субтип 0 и ВИЧ-2 положительных сывороток
• не только выявляют антитела к ВИЧ 2, но и строго дифференцируют антитела к ВИЧ 1 и ВИЧ 2.

2. Аналитическая чувствительность тестов ИммуноКомб HBsAg соответствует Европейскому стандарту.

3. Тесты ИммуноКомб HCV:

• показывают высокую чувствительность, сравнимую с третьим поколением референс-тестов.
• показывают 100% корреляцию с референс-методом (ПЦР)
• определяют сероконверсию так же хорошо, как и подтверждающий тест RIBA, в некоторых случаях раньше, чем референс-тесты третьего поколения ELISA.
• определяют антитела к NS3 и NS4 так же специфично, как и к core антигену.