Глава 4. Инструкция по проведению анализа

Предварительное разбавление образцов и контролей. (Требуется для некоторых наборов см. в "Наставлении по применению ...", прилагаемом к набору).

Реакция Антиген - Антитело (Ряд А).

• Наберите в пипетку разбавленного образца в количестве, указанном в " Наставлении по применении ...", прилагаемом  к набору (от 10 до 50 мкл в зависимости от набора). Проколите носиком пипетки или перфоратором покрытие из фольги над одной из ячеек ряда А Проявочной Ванны и введите образец на дно ячейки. Перемешайте многократно всасывая и вновь вводя раствор. Снимите носик пипетки.
• Повторите шаг 1 для других разбавленных образцов и двух разбавленных контролей. Используйте новую ячейку из ряда А для каждого образца и контроля. Меняйте носики пипетки между образцами.
• • Вставьте Гребенку (стороной с надписями к себе) в ячейки ряда А, содержащие образцы и контроли. Перемешайте: выньте и вставьте Гребенку в ячейки несколько раз.
  • Оставьте Гребенку в ячейках ряда А и выдержите в течение времени, указанного в "в Наставлении по применению ....", прилагаемом к набору. Включите таймер. Перед окончанием экспозиции проколите перфоратором фольгу ячеек ряда В. Не открывайте большего, чем необходимо, числа ячеек.
  • По истечении экспозиции выньте Гребенку из ячеек ряда А.Удалите капли жидкости с заостренных концов Гребенки с помощью чистой фильтровальной бумаги. Не прикасайтесь к фронтальной поверхности Гребенки.

• Первая промывка (ряд В).

  Вставьте Гребенку в ячейки ряда В. Прополощите: резко вынимайте и вставляйте Гребенку в ячейки в течение, по крайней мере, 10 секунд, чтобы  хорошо промыть его. Повторите полоскание  несколько раз в течение 2 минут; в интервалах проколите фольгу ячеек ряда С. По истечении 2 минут выньте Гребенку и удалите капли жидкости также, как на шаге 3c.

• Связывание с Конъюгатом (ряд С).

  Вставьте Гребенку в ячейки ряда С. Перемешайте также как на шаге 3a. Включите таймер на время, указанное в "Наставлении ...", прилагаемом к набору. Проколите фольгу ячеек ряда D. После экспозиции  выньте Гребенку и удалите капли жидкости.

• Вторая промывка (ряд D).

  Вставьте Гребенку в ячейки ряда D. В течение  2 минут несколько раз прополощите также как на шаге 4. Проколите фольгу ячеек ряда Е.По истечении 2 минут выньте Гребенку и удалите капли жидкости.

• Третья промывка ( ряд Е ).

  Вставьте Гребенку в ячейки ряда Е. Несколько раз прополощите в течение 2 минут. Проколите фольгу ячеек ряда F. По истечении 2 минут выньте Гребенку и удалите капли жидкости.

• Цветная реакция (ряд F).

  Вставьте Гребенку в ячейки ряда F .Перемешайте. Включите таймер на 10 минут. Через 10 минут выньте Гребенку.

• Остановка реакции ( ряд Е ).

  Вставьте Гребенку снова в ячейки ряда Е. По истечении 1 минуты выньте Гребенку и дайте ей высохнуть на воздухе.

Удаление отходов

Использованные Проявочные Ванны, носики пипеток, фильтровальная бумага должны уничтожаться как биологически опасные отходы. Использованные перчатки обрабатываются замачиванием в дезрастворах (например в 3-6%-ном растворе перекиси водорода).

Хранение неиспользованных частей набора

Проявочная Ванна.

Если Вы использовали не все ячейки Проявочной Ванны, Вы можете сохранить ее для дальнейшего  использования:

- заклейте использованные ячейки широкой клейкой лентой так, чтобы ничего не могло вылиться из ячеек даже, если Проявочная Ванна будет перевернута.

Другие материалы набора.

Верните оставшиеся Проявочные Ванны, Гребенки, пинцеты, контроли, разбавители образцов и "Инструкция  ..." в оригинальную коробку. Храните в бытовом холодильнике при температуре 2^o-8^oС.

Результаты анализа

Достоверность

Для того чтобы можно было утверждать, что набор работает правильно и что результаты анализа достоверны, необходимо выполнение трех условий:

• Положительный контроль должен дать два (или три) пятна. Верхнее пятно - это внутренний контроль.
• У отрицательного контроля должно присутствовать верхнее пятно (внутренний контроль). Среднее и/или  нижнее либо отсутствует, либо очень слабо выражено, что следует интерпретировать как отрицательный результат.
• У каждого анализируемого образца должно появиться верхнее пятно (Внутренний контроль).

Если хотя бы одно из этих условий не будет выполнено, то результаты считаются недействительными и образцы и контроли должны быть подвергнуты повторному анализу.

Качественная интерпретация результатов

Визуальная интерпретация

Сравните интенсивность окрашивания  нижнего пятна каждого зубца образца с интенсивностью окрашивания нижнего пятна зубца Положительного контроля.

• Пятно с интенсивностью большей или равной интенсивности Положительного контроля указывает на присутствие искомых АТ или АГ и считается положительным результатом.
• Пятно с интенсивностью окрашивания меньшей чем у положительного контроля считается отрицательным результатом

Количественная оценка результатов

Рис. 4. CombScale™

Осуществляется с помощью специального планшета, CombScale прилагаемого к набору ИммуноКомб (Рис. 5).

Откалибруйте CombScale. Поместите нижнюю точку Положительного Контроля под участком шкалы с наиболее близкой окраской. Сдвиньте линейку так, чтобы надпись "C+" появилась в окошечке над участком шкалы с выбранной интенсивностью окраски.

Считайте результаты не меняя калибровочного положения линейки. Для каждого образца подберите участок шкалы наиболее близкий по интенсивности окраски к окраске нижней точки на зубце. Запишите концентрацию (в Ед./мл) по числу в окошке над этим участком как приблизительный титр антител соответствующего образца.

Инструментальное считывание результатов

Возможно с помощью прибора - Рефлектометра CombScan II (Рис. 6), который можно приобрести у фирмы "Биоград".

Документация результатов

В связи с тем, что окрашенные пятна на зубце остаются стабильными длительное время (годы), результаты анализа на Гребенках можно документировать.

Ограничения

Результаты анализа с помощью наборов ИммуноКомб, как и результаты любых других анализов, предназначенных для диагностики in vitro , следует оценивать с учетом клинического обследования пациентов.

Меры предосторожности

• Наборы ИммуноКомб можно использовать только для in vitro диагностики.
• Человеческие материалы, использованные при изготовлении набора, были проверены на инфекционную безопасность и проявили отрицательную реакцию на HBsAg , на антитела против вируса гепатита С и на антитела к ВИЧ. Но так как никакой анализ не может дать полной гарантии отсутствия инфекционных контаминантов, со всеми контрольными растворами и человеческими образцами следует обращаться как с потенциально опасными.
• Работа должна проводиться в хирургических перчатках и лабораторной одежде. Выполняйте принятые в Вашей лаборатории правила техники безопасности.
• Не засасывайте растворы в пипетки ртом.
• Обращайтесь со всеми образцами, использованными Гребенками, Проявочными Ваннами и другими материалами набора как с потенциально опасными отходами.
• Не смешивайте реагенты разных наборов.
• Не используйте наборы с истекшим сроком хранения.

Хранение наборов ИммуноКомб

Храните наборы в оригинальной упаковке при температуре 2-8^oС.При этих условиях набор остается стабильным до срока, указанного на этикетке. Не замораживайте набор.