Вирус гепатита B (HBV) принадлежит к новому семейству ДНК вирусов Hepadnaviridae. К его особенностям относятся поразительный гепатотропизм и уникальный способ репликации с использованием механизма обратной транскрипции. Собранный вирион или частица Дейна состоит из кольцевой молекулы ДНК, защищенной ядерным капсидом/коровым антигеном (HBcAg). Внешняя оболочка вируса образована поверхностным антигеном (HBsAg). HBsAg также обнаруживается в сыворотке в виде неинфекционных сферических частиц или нитей. Малые компоненты HBV- нуклеакапсиды, HBe антиген (HBeAg) также можно обнаружить в крови во время репликативной фазы вируса.

HBV является широко распространенным по всему миру вирусом. В Москве, как и в целом по России, в последние годы отмечается рост заболеваемости парентеральными вирусными гепатитами [158].

Основные пути заражения: горизонтальный - половое и парентеральное заражение, и вертикальный - перинатальная передача от инфицированной матери плоду. Клинические последствия от заражения гепатитом B варьируют от полностью неразличимых (70% случаев) до острых гепатитов. Большинство пациентов полностью выздоравливают в течение 6 месяцев с начала заболевания. У небольшой доли инфицированного населения (<1.5%) могут развиться скоротечные гепатиты, часто с фатальным исходом. У значительной части (до 10%) взрослого населения HBV может сохраниться, постепенно развиваясь в хронический гепатит, конечным этапом развития которого будет цирроз и / или карцинома печени. Хронические носители вируса гепатита B (350 миллионов по всему миру) составляют основной его резервуар вируса и являются основным источником распространения болезни.

Перинатальная передача HBV инфекции от инфицированной матери к ее ребенку является одним из наиболее значимых путей распространения гепатита В. Около 70-95% случаев перинатальной передачи происходит во время родов, однако, 5% новорожденных детей заражаются антенатально, т.е. еще в утробе матери [159]. Перинатальная передача HBV возможна: -через поврежденную плаценту, когда может происходить смешивание крови матери и плода; -во время прохождения ребенка через родовые пути в результате повреждения кожи и слизистых оболочек, или при заглатывании материнской крови; - в результате контакта ребенка с кровью матери при родах путем кесарева сечения.

Все беременные женщины должны обследоваться на наличие HBs Ag 2 раза в течение беременности: 1-ый раз – в первом триместре, 2- ой раз – в третьем триместре.

Выявление HBsAg у беременной женщины не является показанием к искусственному прерыванию беременности или родоразрешению с помощью кесарева сечения.

Сроки заболевания HBV-инфекцией во время беременности и наличие маркеров высокой инфекционности (HBsAg) являются важными факторами, определяющими перинатальную передачу ВГВ. У HBsAg-положительных матерей вероятность перинатального инфицирования своего ребенка составляет от 70 до 90% [158]. Почти 90% из этих перинатально инфицированных детей могут стать хроническими носителями или развить в будущем хронический гепатит В (30-35%). У детей, родившихся от матерей, не имеющих маркера высокой инфекционности (HBsAg), риск перинатальной передачи значительно ниже - менее 10%.

Горизонтальная передача HBV-инфекции возможна при тесных контактах матери и ребенка, особенно в первые месяцы, годы жизни и связана с микротравматизацией слизистых и кожных покровов. Следует учитывать, что при отсутствии повреждений молочной железы у родильницы, ребенок может находиться на грудном вскармливании.

Дети, родившиеся от матерей с HBs-антигеном, относятся к группе высокого риска должны быть вакцинированы. Биохимические исследования крови и исследования на HBs-антиген назначаются ребенку в 6-12 месяцев.

В типичных случаях острой HBV инфекции HBsAg, часто в сопровождении HBcAg, появляется в крови за 2-6 недель до появления симптомов или биохимических признаков гепатита и достигает максимума во время острой фазы заболевания. Присутствие HBsAg в сыворотке более 6 месяцев отражает статус хронического носителя HBV. Поэтому, скрининг по HBsAg, позволяет выявлять HBV инфицированных пациентов и помогает в диагностировании и прогнозировании течения болезни (Рис. 10).

Рисунок 10. Относительная концентрация маркеров гепатита B в сыворотке хронического носителя, в зависимости от времени инфицирования

Высокие титры (> 1:1000) IgM антител на HBcAg появляются во время острой фазы HBV инфекции, совпадая с появлением IgG и ростом аминотрансфераз. Так как уровень анти-HBc IgM быстро уменьшается, высокий титр этих антител является свидетельством острой фазы гепатита B. Поэтому тестирование на анти-HBc IgM является полезным инструментом при диагностике острой HBV инфекции, позволяющим различать острые и хронические гепатиты B.

Во время активной фазы болезни в организме появляются как IgM, так и IgG антитела к вирусному коровому антигену. В то время как анти-HBc IgM быстро исчезает, анти-HBc IgG сохраняются годы. Поэтому анти-HBc IgG являются удобным индикатором для подтверждения предшествующих контактов с HBV. Более того, анти-HBc IgG является единственным маркером, который можно обнаружить во время так называемого серологического окна острого гепатита B, периода, когда анти-HBs антитела, указывающие на элиминацию вируса, еще не обнаруживаются, а специфические IgM уже исчезли (Рис. 11).

Рисунок 11. Относительная концентрации маркеров гепатита B при острой инфекции в зависимости от времени инфицирования

Антитела к HBsAg (анти-HBs) являются основными нейтрализующими HBV антителами, которые защищают против повторного инфицирования и сохраняются в течение всей жизни. Поэтому обнаружение анти-HBs служит индикатором выздоровления от гепатита B или успеха вакцинации с использованием HBsAg частиц. Концентрация антител ? 10 IU/L указывает на иммунитет к HBV.

В 1999-2001 гг. ВОЗ провела сравнительные испытания быстрых простых тестов 10 производителей (Determine HBsAg, DoubleCheck HBs Antigen, ImmunoComb II HBs Ag 90’, Serodia-HBs.PA, GLD Rapid HBsAg, Hepacard, AQ One HBsAg Test, Uni-Cold HBsAg, Genedia HBsAg, Hep B Stark-Pack) для обнаружения поверхностного антигена вирусного гепатита B [160]. При этом оценивалась не только чувствительность и специфичность, но и результаты, полученные на сероконверсионных и низкотитражных панелях. В качестве образцов сравнения, референс-тестов, выступали ELISA тест-системы MonolisaAgHBs Plus и Hepanostika HBsAg. Результаты испытаний представлены на рисунке. Столбцы диаграммы характеризуют количество выявленных положительных образцов низкотитражной и сероконверсионных панелей. Как видно из диаграммы (Рис.12), тесты ИммуноКомб продемонстрировали результаты, близкие или превосходящие результаты ИФА референс-тестов на сероконверсионных и низкотитражных панелях.

 

Рисунок 12. Сравнительная характеристика тестов при диагностике образцов сероконверсионных и низкотитражных панелей

Количество образцов низкотитражной панели, идентифицированных тестом ИммуноКомб как содержащие HBsAg, совпадает с количеством образцов, выявленных референс-тестом Hepanostika и на один образец меньше, чем референс-тестом Monolisa. Количество образцов сероконверсионной панели, диагностированых тест-системами ИммуноКомб, превышает показатель референс-тестов. Все остальные тесты отставали от референс-тестов в определении положительных образцов этих панелей. Как видно из данных, представленных на рисунке 13 ИммуноКомб HBsAg 90’ диагностирует HBsAg в среднем на 1 сутки раньше, чем референс-тест Monolisa Ag HBs Plus. Все остальные тесты обнаруживают HBsAg, отставая от референс-теста, по крайней мере, на 2 суток.

Рисунок 13. Образцы сероконверсионной панели, определяемые каждым из тестов относительно референс-теста Monolisa Ag HBs Plus (0 соответсует первому образцу, определяемому референс-тестом)

Эффективность быстрых простых тестов по выявлению поверхностного антигена вируса Гепатита В не уступает аналогичным характеристикам ELISA тестов. ИммуноКомб диагностирует HBsAg на более ранних стадиях и в более низких концентрациях, чем другие участвующие в испытаниях тесты.

Данный диагностический препарат позволяет диагностировать антиген различных субтипов в концентрации 0,25 нг/мл и проводить индивидуальное и групповое тестирование.

В таблице 24 представлены результаты международных испытаний БПТ ИммуноКомб HBS AG 90' [13].

Таблица 24. Качество тестов ИммуноКомб HBS AG 90'

Год	Страна	Место проведения	Образцы и панели		Хар-ки панелей и референс-тесты	Чув- стви- тель- ность	Специ- фич- ность
			Кол-во	Характер Сывороток
1991	Франция	INSERM Lyon	266	199 HBsAg полож. образца 72 отриц. образца	Austria II, Abbott	99%	97,2%
1994	Израиль	Вирусологическая лаборатория	444	195 положит. 1 слабоположит. 248 отриц. образцов	Austria II, Abbott	100%	99,5%
1995	Франция	ADM, Париж, Национальный Институт Трансфузиологии	30	19 положит. сыворо ток разл. субтипов вируса гепатита B, 2 отрицат.образца разбавленных, 3 образца от недавно вакцинир.индивидуумов(< 0,5 нг/мл) 6 сывороток хронич. носителей HBV	панели DECODAGE, PL21-PL30, Франция	0,48	не определялась.
1998	Израиль	Орженикс, Явна	164	положит. сыворотки: к HBsAg – 1 положит.сыворотки: к anti Toxo IgG - 21 положит.сыворотки: к anti Toxo IgM - 20 положит.сыворотки: к anti Toxo IgM - 20 положит.сыворотки: к anti CMV IgG - 20 положит.сыворотки: к anti CMV IgM - 18 положит.сыворотки: к anti HBc IgG - 18 положит.сыворотки: к anti Rubella IgG -15 положит.сыворотки: к anti Rubella IgM-14 положит.сыворотки: к anti HBs AB - 6 положит.сыворотки: к anti HCV - 18 положит.сыворотки: к HIV – 12 отрицат. сыворотки: к HBsAg - 1	Панели BBI; США; сероконверсионная HIV, ADM панель, Франция	не определялась	100%
2001	Франция	Вирусологическая Лаборатория, CERV2, Париж	58	5 положит. сыворот. (0,4 – 0,9 нг/мл) 14 сильно положит. сывороток 8 слабо положит. сывороток. 12 отрицат. сыворо-ток, трудно опреде- ляемых согласно HBsAg, Abbott 19 отрицат. сыворот.	панель BBI; Axsym HBsAg, Abbott; Axsym HBsAg Confirma –tory AFFSAPS	? 0,5 нг/мл, 100%	100%
2003	Франция	Лаборатория Marquis Lanzenberg	71	71 образец от бере- менных женщин и позитивных к HCG ?	Abbott	не опре делял.	100%
2003	Франция	Федеральный медицинский Госпитальный Центр	150	142 образца от беременных женщин 8 положит. сывороток	Platelia Ag HBs Biorad	не определял.	100%

Проведенные испытания показали, что аналитическая чувствительность тестов ИммуноКомб HBsAg соответствует Европейскому стандарту(меньше или равно 0,5нг/мл). Обладая высокой чувствительностью и специфичностью (100% и 99,7%) тест системы ИммуноКомб выявляют сероконверсионные и низкотетражные сыворотки в той же или более низкой концентрации, чем референс-тесты. Независимо от субтипа вируса гепатита В тесты ИммуноКомб достоверно диагностируют присутствие HBsAg.

Возможность быстрого и достаточно чувствительного выявления НВsАg позволяет сократить риск передачи гепатита В в ситуациях, требующих экстренного тестирования. В иммунодиагностике вируса гепатита В имеет особое значение выявление иммунохимических маркеров ВГВ: антигенов HBs Ag, антител Anti HBs, анти HBc. Это позволяет диагностировать форму инфекции, сделать прогноз её течения и показания к вакцинации. Следует подчеркнуть, что тест-системы ИммуноКомб, диагностируя в очень низких концентрациях антиген к ВГВ, позволяют определить все виды HBV частиц, что является наиболее строгим стандартом определения данной инфекции, известным под названием «Французский стандарт».

В таблица 25 приведена схема постановки диагноза инфицированности вирусом гепатита В на основании результатов анализа с помощью ИФА БПТ ИммуноКомб.

Таблица 25. Использование тестов ИммуноКомб для более точной постановки диагноза гепатита B

Результаты				Интерпретация
HBs Ag	HBc IgM	HBc IgG	Anti-HBs
+	–	–	–	Ранняя активная фаза гепатита B
+	+	+	–	Активная фаза гепатита B или рецидив хронической инфекции.
+	–	+	–	Хронический носитель гепатита B (если HBsAg присутствует больше 6 месяцев)
–	+	+	–	Выздоравливающий после гепатита B (недавняя активная инфекция)
–	–	+	+	Выздоровление после гепатита B
–	–	+	–	Период окна HBV
–	–	–	+	Успешная вакцинация HBV
–	–	–	–	Отрицательный результат. Требуется проверка на другие этиологические агенты (HCV и т.п.)

9.1. Обнаружение поверхностного антигена к вирусу гепатита В в сыворотке, плазме или цельной крови

Качественное определение поверхностного антигена к вирусу гепатита В следует проводить с помощью ИФА БПТ ИммуноКомб HBS AG 90' согласно инструкции, прилагаемой к набору. Общую схему постановки анализа см. гл. 4.1, таблица 3, рисунок 3.

Результаты анализа проявляются в виде серо-голубых точек на поверхности зубца гребня. Качественная оценка результата осуществляется визуально, сравнением интенсивности окрашивания нижнего пятна каждого образца с интенсивностью окрашивания на зубце с положительным контролем, или автоматизировано на приборе КомбСкан III™(см. 4.1.6.). На твердую фазу нанесены моноклональные антитела к HBS AG, что позволяет диагностировать 0,25 нг/мл антигена.

9.1.1. Чувствительность и специфичность теста ИммуноКомб HBS AG 90'

Чувствительность и специфичность теста ИммуноКомб HBS AG 90' была оценена на панели из 203 образцов сывороток в сравнении с ИФА – референс тестом Abbot Axsym. Результаты приведены в таблице 26.

Таблица 26. Результаты испытаний

Контрольный метод (ИФА)	ИммуноКомб HBS AG 90'
	положительные	отрицательные
положительные	112	1
отрицательные	0	90

Исходя из этих результатов, были вычислены следующие показатели теста:

• Чувствительность - 99%
• Специфичность – 100%

Чувствительность теста HBs Ag 90’ составляет 0,25 нг/мл.

9.2. Обнаружение IgM антител к коровому антигену вируса гепатита В в сыворотке, плазме или цельной крови

Качественное определение IgM антител к коровому антигену вируса гепатита В следует проводить с помощью ИФА БПТ ИммуноКомб HBC IGM согласно инструкции, прилагаемой к набору. Ниже приведено краткое описание процедуры Общую схему постановки анализа см. гл. 4.1, таблица 3, рисунок 3.

Результаты анализа проявляются в виде серо-голубых точек на поверхности зубца гребня. Качественная оценка результата осуществляется визуально, сравнением интенсивности окрашивания нижнего пятна каждого образца с интенсивностью окрашивания на зубце с положительным контролем, или автоматизировано на приборе КомбСкан III™(см. 4.1.6.).

9.2.1. Чувствительность и специфичность теста Иммунокомб HBC IGM

Чувствительность и специфичность теста ИммуноКомб HBC IGM была оценена на панели 773 образцов сыворотки. Результаты приведены в таблице 27.

Таблица 27. Результаты испытаний

Контрольный метод	ИммуноКомб HBC IGM
Реакция	положительная	отрицательная
положительная	75	0
отрицательная	3	695

Исходя из этих результатов, были вычислены следующие показатели теста:

• Чувствительность - 100%
• Специфичность – 99,5%

9.3. Обнаружение IgG антител к коровому антигену вируса гепатита В в сыворотке, плазме или цельной крови

Качественное определение IgG антител к коровому антигену вируса гепатита В следует проводить с помощью ИФА БПТ ИммуноКомб HBC IGG согласно инструкции, прилагаемой к набору. Общую схему постановки анализа см. гл. 4.1, таблица 3, рисунок 3.

Результаты анализа проявляются в виде серо-голубых точек на поверхности зубца гребня. Качественная оценка результата осуществляется визуально, сравнением интенсивности окрашивания нижнего пятна каждого образца с интенсивностью окрашивания на зубце с положительным контролем, или автоматизировано на приборе КомбСкан III™(см. 4.1.6.).

9.3.1. Чувствительность и специфичность теста Иммунокомб HBC IGG

Чувствительность и специфичность теста Иммунокомб HBC IGG была оценена на панели 879 образцов сыворотки. Результаты приведены в таблице 28.

Таблица 28. Результаты испытаний

Контрольный метод	Иммунокомб HBC IGG
Реакция	положительная	отрицательная
положительная	93	0
отрицательная	7	779

Исходя из этих результатов, были вычислены следующие показатели теста:

• Чувствительность - 100%
• Специфичность – 99,1%

9.4. Количественное определение антител к поверхностному антигену вируса гепатита В в сыворотке, плазме или цельной крови

Количественное определение антител к поверхностному антигену вируса гепатита В следует проводить с помощью ИФА БПТ ИммуноКомб ANTI HBS согласно инструкции, прилагаемой к набору. Общую схему постановки анализа см. гл. 4.1, таблица 3, рисунок 3.

Результаты анализа проявляются в виде серо-голубых точек на поверхности зубца гребня. Количественную оценку результатов осуществляют визуально с помощью шкалы CombScale или автоматически на приборе КомбСкан III™(см. 4.1.6.). Исследуемые образцы с концентрацией большей, либо равной 10 МЕ/л (IU/L) признаются положительными.

9.4.1. Чувствительность и специфичность теста Иммунокомб ANTI HBS

Чувствительность и специфичность теста Иммунокомб ANTI HBS была оценена на панели 170 образцов сыворотки по отношению к двум ИФА тестам. Результаты приведены в таблице 29.

Таблица 29. Результаты испытаний

Контрольный метод	Иммунокомб ANTI HBS
Реакция	положительная	отрицательная
положительная	50	0
отрицательная	2	118

Исходя из этих результатов, были вычислены следующие показатели теста:

• Чувствительность - 100%
• Специфичность - 98.3%