4.1.1.1. Инструкция по проведению анализа

• Предварительное разбавление образцов и контролей

  Для каждого образца и контроля введите по 100 мкл разбавителя образца в отдельную микропробирку или ячейку микротитра.

• В каждую микропробирку или ячейку добавьте по10 мкл образца, Положительного и Отрицательного контролей, входящих в состав набора. Перемешайте: многократно всасывая и вновь впрыскивая раствор.

• Реакция Антиген-Антитело (Ряд A Проявочной Ванны).

  Наберите в пипетку 25 мкл. разбавленного образца. Проколите наконечником или перфоратором покрытие из фольги над одной из ячеек ряда A Проявочной Ванны и введите образец на дно ячейки. Перемешайте, многократно всасывая и вновь впрыскивая раствор. Смените наконечник пипетки.

• Повторите шаг 3 для других разбавленных образцов и двух разбавленных контролей. Используйте новую ячейку из ряда A для каждого образца или контроля. Меняйте наконечники пипетки между образцами.
• • Вставьте Гребень (стороной с надписями к себе) в ячейки ряда A, содержащие образцы и контроли. Перемешайте: выньте и вставьте гребень в ячейки несколько раз.
  • Оставьте Гребень в ячейках ряда A и выдержите 30 минут. Включите таймер. Перед окончанием 30 минутного интервала проколите перфоратором фольгу ячеек ряда B. Не открывайте большего, чем необходимо числа ячеек.
  • По истечении 30 минут выньте Гребень из ячеек ряда A. Удалите капли жидкости с заостренных концов Гребня с помощью чистой фильтровальной бумаги. Не прикасайтесь к фронтальной поверхности Гребня.

• Первая промывка (ряд B).

  Вставьте Гребень в ячейки ряда B. Прополощите: резко вынимайте и вставляйте Гребень в ячейки в течение, по крайней мере, 10 секунд, чтобы хорошо промыть его. Повторите полоскание несколько раз в течение 2 минут; в интервалах проколите фольгу ячеек ряда C. По истечении 2 минут выньте гребень и удалите капли жидкости также, как на шаге 5c.

• Связывание с Коньюгатом (ряд C).

  Вставьте Гребень в ячейки ряда C. Перемешайте также, как на шаге 5а. Включите таймер на 20 минут. Проколите фольгу ячеек ряда D. После 20 минут выньте Гребень и удалите капли жидкости.

• Вторая промывка (ряд D).

  Вставьте Гребень в ячейки ряда D. В течение 2 минут несколько раз прополощите также, как на шаге 6. Проколите фольгу ячеек ряда E. По истечении 2 минут выньте Гребень и удалите капли жидкости.

• Третья промывка (ряд E).

  Вставьте Гребень в ячейки ряда E. Несколько раз прополощите в течение 2 минут. Проколите фольгу ячеек ряда F. По истечении 2 минут выньте Гребень и удалите капли жидкости.

• Цветная реакция (ряд F).

  Вставьте Гребень в ячейки ряда F. Перемешайте. Включите таймер на 10 минут. Через 10 минут выньте Гребень.

• Остановка реакции (ряд E).

  Вставьте Гребень снова в ячейки ряда E. По истечении 1 минуты выньте Гребень и дайте ему высохнуть на воздухе.

Удаление отходов.

Использованные Проявочные Ванны, наконечники, фильтровальная бумага и перчатки уничтожают как биологически опасные отходы.

Хранение неиспользованных частей набора

Проявочная Ванна

Если вы израсходовали не все ячейки Проявочной Ванны, для ее сохранения и дальнейшего использования: заклейте израсходованные ячейки широкой клейкой лентой, так, чтобы ничего не могло вылиться из ячеек, даже если Проявочная Ванна будет перевернута.

Другие материалы набора

Верните оставшиеся Проявочные Ванны, Гребни, перфоратор, контроли, растворители образца и инструкции в оригинальную коробку. Храните при температуре 2^o-8^o C.

Результаты анализа

Достоверность

Для того чтобы можно было утверждать, что набор работает правильно и результаты анализа достоверны, необходимо выполнение следующих трех условий (смотри Рисунок 5):

• Положительный контроль должен дать две точки на зубце гребня.
• У отрицательного контроля должна присутствовать верхняя точка (Внутренний Контроль). Нижней точки либо нет, либо она проявляется слабо, не влияя на интерпретацию результатов.
• У каждого анализируемого образца должна появиться верхняя точка (Внутренний Контроль). Это также подтвердит то, что вы не забыли добавить образец.

Рисунок 5. Достоверность результатов

Если хотя бы одно из этих трех условий не будет выполнено, то результаты считают недействительными и образцы и контроли должны быть подвергнуты повторному анализу.

Считывание и интерпретация результатов

Просмотр

Сравните интенсивность окрашивания нижней точки каждого зубца образца с интенсивностью окрашивания нижней точки зубца Положительного Контроля (Рисунок 6).

• Точка с интенсивностью большей или равной интенсивности Положительного Контроля указывает на присутствие IgG антител к H.Pylori в титре не ниже 20 Ед/мл.
• Точку с интенсивностью окрашивания меньшей, чем у Положительного Контроля считают отрицательным результатом.

Рисунок 6. Результаты анализа

Визуальное считывание и интерпретация результатов

Уровень анти-H.Pylori IgG в каждом из образцов можно оценить, сравнивая интенсивность окраски нижней точки каждого зубца с цветовой шкалой КомбСкейл (CombScale), входящей в состав набора. Это делается следующим образом (Рисунок 7).

Рис. 7. Шкала КомбСкейл

• Откалибруйте шкалу. Поместите нижнюю точку Положительного Контроля под участком шкалы с наиболее близкой окраской. Сдвиньте линейку так, чтобы надпись "20; C+" появилась в окошечке над участком шкалы с выбранной интенсивностью окраски.
• Считайте результаты, не меняя калибровочного положения линейки. Для каждого образца подберите участок шкалы, наиболее близкий по интенсивности окраски к окраске нижней точки на зубце. Запишите концентрацию (в Ед/мл) по числу в окошке над этим участком как приблизительный титр IgG антител к H.Pylori соответствующего образца.

Интерпретация результатов

Величины, равные, либо большие 20 Ед/мл, указывают на возможное инфицирование H.Pylori.

Документация результатов

В связи с тем, что окраска точек является стабильной, храните Гребни для дальнейшей документации.

Приборное считывание и интерпретация результатов

Результаты анализа можно учитывать автоматически, на приборе Комбскан III™ (CombScan III™ ), производства фирмы Орженикс. Система Комбскан III™ использует принципиально новую функцию для обработки оптической плотности точек на сканируемых диагностических Гребнях, позволяющую количественно оценивать титр антител в крови.

Данный прибор совместим со всеми существующими операционными системами, предназначенными для ПК производства корпорации Microsoft. Прибор Комбскан III™ адаптирован для российских пользователей. Хранит архив данных и позволяет выводить данные на экран и принтер. Надежная система проверки позволяет избежать дублирования данных. Графический интерфейс разработан специалистами в области компьютерного дизайна и производства диагностических приборов. Позволяет создать систему пользователей с различными степенями допуска. Обладает легкой системой поиска в базе данных.

Для работы со сканером CombScan III™ необходимы: персональный компьютер ПЕНТИУМ с присоединением универсальной последовательной шины USB и операционные системы(Microsoft Windows ’98 или Microsoft Windows Millennium, или Microsoft Windows 2000, или Microsoft Windows XP. Установите программное обеспечение сканера до подклюяения сканера к Вашему компьютеру.

Выполните, перед сканированием гребня валидацию сканера (проверку его работоспособности). Для валидации вашего сканера CombScan III™ пользуйтесь исключительно гребенем для подтверждения‚ поставляемым с программой CombScan III™. В окне ‘Orgenics CombScan III валидации’ введите данные, напечатанные с правой стороны гребня на ярлыке: в окне ‘Каталог #’ введите номер каталога гребеня для подтверждения (Cat.#). В окне ‘Cерийный номер #’ введите порядковый номер гребеня (S.N.). Установите гребень в смотровую рамку лицевой стороной к стеклу (Рис.8). Выровняйте прямую часть гребня с краем смотровой рамки. При этом зубцы гребня должны быть направлены к центру окна.

Рисунок 8. Установка гребня в сканере.

Как только CombScan III™ прошел стадию валидации, он готов к сканированию и анализу гребня. Тест должен включать, по меньшей мере, один позитивный контроль‚ чтобы CombScan III™ мог его прочитать и интерпретировать.

При использовании части гребня укажите число зубцов. Обратите внимание‚ что номера зубцов‚ которые не прочитаны‚ окрашиваются в розовый цвет (т е. они бездействуют).

После введения всех данных гребня установите его лицевой стороной к считывающей стеклянной рамке на сканере. После успешного сканирования появится экран результатов. Зеленый прямоугольник в левом верхнем углу экрана указывает на то‚ что сканер был успешно аттестован. Красный прямоугольник говорит о том‚ что сканер не аттестован. Это состояние закрывает доступ к клиническим данным. Вы можете увидеть клинические данные‚ значения абсолютной и удельной поглощающей способности‚ щелкнув соответствующие клавиши в левой нижней части экрана.

Дополнительно к значениям поглощающей способности‚ экран показывает клинические данные исследования‚ окрашенные согласно приведенной ниже таблице 4:

Таблица 4. Клинические данные исследования

Результаты исследования сохраняются автоматически в виде файла. Для получения распечатки результатов щелкните «печать».

Ограничения

Результаты этого анализа, как и результаты любых других анализов, предназначенных для диагностики in vitro, следует оценивать, связывая со всеми симптомами, клинической историей и результатами других обследований пациента.